利用细菌双杂交文库筛选磁小体链装配过程中的关键蛋白
副标题:潘卫东,解春兰
时间:2012-07-02 来源:中科院电工所陈传芳供稿文本大小:【大 | 中 | 小】 【打印】
趋磁细菌中磁小体链装配是趋磁性机制研究的关键,其过程涉及到诸多重要蛋白如MamJ & MamK等。我们的研究以MamJ和MamK为切入点,通过双杂交方法筛选相互作用蛋白,以探索磁小体链装配过程中的关键组分。
采用BacterioMatchⅡ two-hybrid系统开展研究。将磁螺菌AMB-1基因组片段随机破碎,纯化0.5-2.0kb片段作为target连接到pTRG载体上,构建AMB-1双杂交文库;同时,将AMB-1的mamJ和mamK全序列构建在pBT载体上,作为钓饵。通过初筛获得大量阳性克隆,进一步的验证分析表明,Amb1722的CAS结构域与MamJ有弱相互作用;Amb0854的MCPs结构域、Amb3498和Amb3568与MamK表现出较强的相互作用;Amb0024、Amb1699、Amb1807、Amb1963/CheR和Amb2277/EAL与MamK之间亦存在弱相互作用。上述结果有利于进一步明确磁小体装配过程中基于MamJ & MamK的相互作用蛋白网络,为最终诠释磁小体链的精细装配机制提供思路。
趋磁细菌中磁小体链装配是趋磁性机制研究的关键,其过程涉及到诸多重要蛋白如MamJ & MamK等。我们的研究以MamJ和MamK为切入点,通过双杂交方法筛选相互作用蛋白,以探索磁小体链装配过程中的关键组分。
采用BacterioMatchⅡ two-hybrid系统开展研究。将磁螺菌AMB-1基因组片段随机破碎,纯化0.5-2.0kb片段作为target连接到pTRG载体上,构建AMB-1双杂交文库;同时,将AMB-1的mamJ和mamK全序列构建在pBT载体上,作为钓饵。通过初筛获得大量阳性克隆,进一步的验证分析表明,Amb1722的CAS结构域与MamJ有弱相互作用;Amb0854的MCPs结构域、Amb3498和Amb3568与MamK表现出较强的相互作用;Amb0024、Amb1699、Amb1807、Amb1963/CheR和Amb2277/EAL与MamK之间亦存在弱相互作用。上述结果有利于进一步明确磁小体装配过程中基于MamJ & MamK的相互作用蛋白网络,为最终诠释磁小体链的精细装配机制提供思路。
图一 AMB-1 双杂交文库