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利用细菌双杂交文库筛选磁小体链装配过程中的关键蛋白

副标题:潘卫东,解春兰

时间:2012-07-02  来源:中科院电工所陈传芳供稿文本大小:【 |  | 】  【打印

    趋磁细菌中磁小体链装配是趋磁性机制研究的关键,其过程涉及到诸多重要蛋白如MamJ & MamK等。我们的研究以MamJMamK为切入点,通过双杂交方法筛选相互作用蛋白,以探索磁小体链装配过程中的关键组分。 

    采用BacterioMatch two-hybrid系统开展研究。将磁螺菌AMB-1基因组片段随机破碎,纯化0.5-2.0kb片段作为target连接到pTRG载体上,构建AMB-1双杂交文库;同时,将AMB-1mamJmamK全序列构建在pBT载体上,作为钓饵。通过初筛获得大量阳性克隆,进一步的验证分析表明,Amb1722CAS结构域与MamJ有弱相互作用;Amb0854MCPs结构域、Amb3498Amb3568MamK表现出较强的相互作用;Amb0024Amb1699Amb1807Amb1963/CheRAmb2277/EALMamK之间亦存在弱相互作用。上述结果有利于进一步明确磁小体装配过程中基于MamJ & MamK的相互作用蛋白网络,为最终诠释磁小体链的精细装配机制提供思路。

  趋磁细菌中磁小体链装配是趋磁性机制研究的关键,其过程涉及到诸多重要蛋白如MamJ & MamK等。我们的研究以MamJMamK为切入点,通过双杂交方法筛选相互作用蛋白,以探索磁小体链装配过程中的关键组分。 

  采用BacterioMatch two-hybrid系统开展研究。将磁螺菌AMB-1基因组片段随机破碎,纯化0.5-2.0kb片段作为target连接到pTRG载体上,构建AMB-1双杂交文库;同时,将AMB-1mamJmamK全序列构建在pBT载体上,作为钓饵。通过初筛获得大量阳性克隆,进一步的验证分析表明,Amb1722CAS结构域与MamJ有弱相互作用;Amb0854MCPs结构域、Amb3498Amb3568MamK表现出较强的相互作用;Amb0024Amb1699Amb1807Amb1963/CheRAmb2277/EALMamK之间亦存在弱相互作用。上述结果有利于进一步明确磁小体装配过程中基于MamJ & MamK的相互作用蛋白网络,为最终诠释磁小体链的精细装配机制提供思路。

  
  
 

  

  图一 AMB-1 双杂交文库
   
    

  

 

  图二 筛选出蛋白的交联相互作用
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